【出 处】：

【作 者】： 张心菊 [1] ; 顾小叶 [1] ; 刘双春 [2] ; 马玮哲 [1] ; 关明 [3]

【摘 要】目的建立荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变的方法，评估JAK2 V617F突变在诊断骨髓增殖性疾病和白血病中的临床意义。方法选取71例慢性粒细胞性白血病（CML）、22例原发性血小板增多症（ET）、11例原发性骨髓纤维化（PMF）、9例真性红细胞增多症（PV）、7例嗜酸粒细胞增多症患者，分别采用荧光定量PCR、突变特异性扩增系统（ARMS）对JAK2 V617F突变进行检测，并采用基因测序对结果进行验证。将具有JAK2 V617F纯合子突变的人类红白血病细胞株（HEL）DNA作为阳性对照，比较荧光定量PCR和ARMS对JAK2基因V617F突变的检测敏感度。结果采用荧光定量PCR检测，野生型的熔解温度（Tm）峰出现于（75．0±0．2）℃处，突变型的Tm峰出现于（76．6±0．2）℃处。JAK2基因V617F突变在PV、ET、PMF等骨髓增殖性疾病中的检出率分别为8例（88．9％）、12例（54．5％）、7例（63．6％），但在71例CML中只检出1例（1．4％）。荧光定量PCR与ARMS的结果符合率为100％，结果经过测序证实。使用荧光定量PCR法可在每10^6个正常白细胞中检出低至10^2个HEL细胞，而使用ARMS方法时要在每10^6个正常白细胞中HEL细胞达到10^4个时，方可检测出，前者比后者方法灵敏100倍。结论成功地建立了荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变的方法，比ARMS更灵敏、简便，适合临床使用。JAK2基因V617F突变在骨髓增殖性疾病中有较高的检出率，可作为骨髓增殖性疾病特异性诊断指标。