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【摘 要】目的通过克隆人聚角微丝蛋白（filaggrin）基因，构建重组表达质粒，获得具活性的纯化重组蛋白，建立人AFA间接ELISA检测法，以评价AFA在RA诊断中的价值。方法构建重组表达载体，在大肠杆菌Rosetta—gami（DE3）中表达；融合蛋白经Ni—NAT树脂柱进行亲和层析纯化，建立间接ELISA检测AFA方法，并用于检测114例RA患者、56例SLE患者、32例OA患者及40名健康体检者血清中抗人AFA；分析AFA和抗CCP抗体诊断RA的相关性。结果扩增出321bp人filaggrin基因片段，构建了具有正确序列的质粒载体pET-28a（＋）-filaggrin，转化大肠杆菌Rosetta—gami（DE3）中经诱导产生高水平的表达产物。经SDS—PAGE分析，在相对分子质量为14000处出现新生蛋白带。用Ni—NAT树脂纯化后得到具有活性的纯化人filaggrin重组蛋白。间接ELISA检测标本血清结果显示，RA组AFA检测吸光度（A）值为0．473±0．248，与SLE组、OA组及健康对照组的A值（分别为0．160±0．088、0．050±0．018、0．121±0．040）两两组间比较，差异具有统计学意义（t值分别为12．004、14．464、18．078，P均〈0．01）。AFA在RA组、SLE组及OA组阳性率分别为48．2％、5．4％和3．1％。RA组AFA阳性率与SLE组、OA组及健康对照组比较，差异有统计学意义（χ^2=67．088，P〈0．01）。AFA与抗CCP抗体对RA的诊断呈正相关（r=0．42，P〈0．05）。AFA与抗CCP阳性一致率为70．1％，114例患者中有10例患者抗体CCP阴性，而AFA检测结果为阳性。AFA对RA诊断的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为48．2％、96．9％、93．2％和67．9％。结论用纯化filaggrin融合蛋白建立的间接ELISA检测抗人AFA的方法，对RA诊断具有较好敏感度和特异度，AFA与抗CCP抗体共同检测可提高检测阳性率。