【出 处】：

【作 者】： 楼金吐 ; 吴亦栋 ; 李建平 ; 陈理华 ; 陈露萍 ; 尚世强

【摘 要】目的建立细菌革兰阴、阳性菌双重实时荧光定量检测体系，探讨其检测败血症的临床应用价值。方法分析细菌16SrRNA基因序列，在高度保守区自行设计通用引物和革兰阴性和阳性分型探针，选取临床较常见的35株菌株进行细菌革兰双检实时荧光定量PCR方法检测；对临床疑为败血症的512例新生患儿分别做细菌革兰双检荧光定量PCR和血培养检测。结果细菌革兰双检荧光定量PCR具有较好的敏感性和特异性，能稳定检测到10CFU左右细菌数。35株菌株进行细菌革兰双检荧光定量PCR检测，均为阳性，且革兰阴、阳性菌能正确分型和定量。巨细胞病毒、EB病毒、乙肝病毒、新型隐球菌及白色念珠菌、人基因组DNA及空白对照均为阴性。对临床疑为败血症的512份新生患儿标本中，革兰双检荧光定量PCR检测血标本阳性率8．20％（42／512），血培养阳性率6．25％（32／512），前者明显高于后者，差异具有统计学意义（χ^2=8．10，P〈0．01），30例非感染性疾病同期患儿血标本革兰双检荧光定量PCR及细菌培养均为阴性。若以血培养作为对照，细菌革兰双检荧光定量PCR方法的诊断敏感度为100％，特异度为97．92％，准确性98．05％。结论建立了用通用引物和分型双荧光探针的细菌革兰双检荧光定量PCR方法。其检测快速、准确，具有很大的临床推广价值。