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【摘 要】目的建立DHPLC技术分析PCa特异性PCA3基因启动子多态性的技术平台。方法在PCA3基因启动子区域设计1对引物，以本室先前已经建立的11种（C2T6、C2T5、C3T5、C2T5／C2T6、C3T5／C3T4、C3T5／C4T5、C3T5／C2T5、C3T5／C2T6、C3T5／C1T8、C2T5／C3T4、C2T6／C2T7）已知多态性的PCA3基因启动子的克隆质粒为标准品，通过优化DHPLC检测体系，建立其多态性克隆质粒的标准图谱。采用完全随机设计，从200例病理确诊为PCa患者中选取147例，对其PCA3基因启动子的扩增产物进行DHPLC分析，比较各标本洗脱峰与标准克隆质粒的DHPLC图谱，以判断临床标本PCA3基因多态性类型，并对这些基因型再行克隆测序予以验证。结果通过克隆质粒优化DHPLC检测体系，最适检测体系为：含44．3％A洗脱液（0．1mol／L TEAA、0．025％ACN）和55．7％B洗脱液（0．1mol／L TEAA、25％ACN）的起始洗脱梯度，含35．3％A洗脱液和64．7％B洗脱液的终止洗脱梯度，柱温53℃，流速：0．9ml／min，在该条件下DHPLC用8种杂合型克隆质粒（C2T5／C2T6、C3T5／C3T4、C3T5／C4T5、C3T5／C2T5、C3T5／C2T6、C3T5／C1T8、C2T5／C3T4、C2T6／C2T7）进行重复性验证，结果显示，同一多态性色谱峰中2峰的出峰时间之差的批间CV值在0％～6．67％之间。11种克隆质粒多态性标本仅通过1～2次洗脱，就能根据峰型和各峰的出峰时间将其区分开。147例PCa患者中，144例DHPLC检测结果和克隆测序结果一致（Kappa=1，P=0．000），并出现3种新的峰型，经克隆测序验证为3种新的多态性（C3T5／C1T6、C2T5／C1T8、C3T5／C2T7）。结论成功建立的DHPLC分析PCA3基因启动子多态性的技术方法，可对PCA3基因启动子多态性进行基因型别鉴定。该方法具快速、准确、经济、高通量、重复性好、自动化等特点，为进一步研究PCa基因多态性提供了技术平台。