【出 处】：

【作 者】： 许先国 ; 朱发明 ; 刘瑛 ; 洪小珍 ; 马开荣 ; 蓝小飞 ; 严力行

【摘 要】目的建立一种基于DNA扩增和测序分型（PCR sequencing—based typing，PCR—SBT）的人类血小板抗原HPA-1～HPA-16w的基因分型方法。方法从免疫多态性数据库中下载HPA-1-HPA-16w的全套HPA核酸序列，以Primer Premier 5．0软件设计引物，特异性扩增包含HPA—1a／1b到HPA-16aw／16bw多态性的核酸片段。通过调整引物序列和PCR条件获得单一的特异性扩增产物，PCR产物纯化后直接进行DNA序列分析并确定HPA基因型。通过对2份标准样本的HPA分型验证PCR-SBT方法的准确性；并利用PCR-SBT法对2008年度国际输血协会（ISBT）第14届国际血小板免疫学工作组提供的16份比对样本（包括6个含有基因突变的干扰样本）进行HPA基因分型。结果设计11对引物扩增和测序16个HPA系统。2份标准样本的HPA基因型分别为HPA：1aa／2aa／3ab／4aa／5ab／6aa．／7aa．／8aa／9aa／10aa／11aa／12aa／13aa／14aa／15aa／16aa和HPA：1aa／2aa／3aa／4aa／5aa／6aa／7aa／8aa／9aa／10aa／11aa／12aa／13aa／14aa／15aa／16aa。16份ISBT考核样本的256个HPA基因型结果清晰，其中HPA-1～HPA-6w、HPA-9w和HPA-15共8个系统的128个基因型结果与ISBT参考结果完全一致。结论建立了HPA-1～HPA-16w的PCR—SBT分型方法，结合高通量的DNA序列分析仪，具有简单、快速和准确的优点，适合于临床HPA全套基因分型，具有良好的应用前景。